細(xì)胞計(jì)數(shù)儀驗(yàn)證
簡(jiǎn)要描述:細(xì)胞計(jì)數(shù)儀驗(yàn)證目前市場(chǎng)上有兩類細(xì)胞計(jì)數(shù)儀:一類是明場(chǎng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀僅需簡(jiǎn)單的臺(tái)盼藍(lán)染色,另一類是熒光場(chǎng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀,需要相應(yīng)的熒光染料。
產(chǎn)品型號(hào):
所屬分類:細(xì)胞計(jì)數(shù)儀驗(yàn)證
更新時(shí)間:2024-03-28
廠商性質(zhì):生產(chǎn)廠家
品牌 | 其他品牌 | 價(jià)格區(qū)間 | 面議 |
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產(chǎn)地類別 | 國(guó)產(chǎn) | 應(yīng)用領(lǐng)域 | 醫(yī)療衛(wèi)生,生物產(chǎn)業(yè) |
細(xì)胞計(jì)數(shù)儀驗(yàn)證
1.細(xì)胞計(jì)數(shù)儀概述
細(xì)胞計(jì)數(shù)儀是用來進(jìn)行細(xì)胞濃度檢測(cè)的儀器,目的是為了明確培養(yǎng)的細(xì)胞在某一時(shí)間段的密度,及時(shí)補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)液,以便其能夠良好生長(zhǎng),一般以每毫升細(xì)胞數(shù)(細(xì)胞/ml)來表示計(jì)數(shù)結(jié)果。那么這就需要測(cè)量死細(xì)胞和活細(xì)胞的濃度,在細(xì)胞中,細(xì)胞死亡是正常的,總細(xì)胞數(shù)中活細(xì)胞所占的百分比稱為細(xì)胞活力,也可叫做存活率。對(duì)細(xì)胞活力的應(yīng)用可用于對(duì)復(fù)蘇后細(xì)胞凍存和復(fù)蘇效果的檢測(cè),也可用于在組織中對(duì)細(xì)胞進(jìn)行分離時(shí)是否存在損傷的檢測(cè)?,F(xiàn)在常用的對(duì)細(xì)胞死活的辨別方法是通過使用臺(tái)盼藍(lán),臺(tái)盼藍(lán)染色的原理是活細(xì)胞不會(huì)被染色,而死細(xì)胞能夠染色,另一個(gè)是熒光染色法來鑒別。細(xì)胞計(jì)數(shù)儀有兩個(gè)重要的功能,一個(gè)是計(jì)數(shù),另一個(gè)就是對(duì)細(xì)胞是否死亡的判斷。目前市場(chǎng)上有兩類細(xì)胞計(jì)數(shù)儀:一類是明場(chǎng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀僅需簡(jiǎn)單的臺(tái)盼藍(lán)染色,另一類是熒光場(chǎng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀,需要相應(yīng)的熒光染料。
2.細(xì)胞計(jì)數(shù)儀的原理
(1) 臺(tái)盼藍(lán)染色原理(明場(chǎng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀):臺(tái)盼藍(lán)是細(xì)胞跨膜染料,活細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)完整,臺(tái)盼藍(lán)無法通過,細(xì)胞呈中心透亮具有明顯的輪廓。死細(xì)胞膜通透性改變,臺(tái)盼藍(lán)可跨過死細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),使細(xì)胞顏色加深,呈現(xiàn)實(shí)心的圓點(diǎn)與活細(xì)胞中心透亮輪廓清晰有明顯的差異,根據(jù)這種形態(tài)的差異可以明顯區(qū)別活細(xì)胞和死細(xì)胞進(jìn)行區(qū)別計(jì)數(shù)。
(2) AO/PI 熒光染色原理(暗場(chǎng)細(xì)胞計(jì)數(shù)儀):AO/PI 為細(xì)胞核染料,AO 為吖啶橙是一種小分子染料,可以跨過所有細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),使有核細(xì)胞標(biāo)記上綠色熒光。PI 是碘化丙啶一種大分子染料,只有細(xì)胞死亡膜通透性改變后才能跨膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi),使死細(xì)胞的核標(biāo)記上紅色熒光。AO/PI 染細(xì)胞后,死細(xì)胞會(huì)同時(shí)染上 AO 和 PI,AO 的發(fā)射光波長(zhǎng) 532 nm 左右,PI 的激發(fā)光波長(zhǎng)剛好與 AO 發(fā)射光波長(zhǎng)相重,兩種染料同染上死細(xì)胞核時(shí)會(huì)發(fā)生熒光共振能量轉(zhuǎn)移,AO 的發(fā)射光被 PI 吸收,所以死細(xì)胞只會(huì)顯示紅色熒光,而活細(xì)胞只有綠色熒光。因此,通過特異性染色的細(xì)胞上標(biāo)記的紅色熒光和綠色熒光就可以快速辨別出死細(xì)胞和活細(xì)胞。
注:AO/PI試劑由可以發(fā)出綠色熒光的DNA結(jié)合染料吖啶橙(AcridineOrange,簡(jiǎn)稱AO)和可以發(fā)出紅色熒光的DNA結(jié)合染料碘化丙啶(Propidiumiodide,簡(jiǎn)稱PI)組成。
3.為什么細(xì)胞計(jì)數(shù)儀要做驗(yàn)證呢?
首先應(yīng)該明確做驗(yàn)證的目的,就是為了保證使用的儀器檢測(cè)出的結(jié)果數(shù)據(jù)準(zhǔn)確、可信。細(xì)胞計(jì)數(shù)儀是用來檢測(cè)細(xì)胞數(shù)目的儀器,對(duì)其準(zhǔn)確度要求很高,比如它的重復(fù)復(fù)現(xiàn)結(jié)果的能力、穩(wěn)定性等等。新儀器使用前以及儀器使用一段時(shí)間后都需要對(duì)其進(jìn)行驗(yàn)證,保證檢測(cè)細(xì)胞數(shù)目的結(jié)果準(zhǔn)確、可信,就必須對(duì)它的安裝、環(huán)境等各部分系統(tǒng)要求進(jìn)行驗(yàn)證,以證明該儀器符合檢測(cè)的目的和要求,產(chǎn)生的誤差也在規(guī)定范圍內(nèi)。那么儀器驗(yàn)證就是對(duì)儀器各功能進(jìn)行檢測(cè)、驗(yàn)證使其滿足使用者的要求。這就需要通過設(shè)計(jì)合理的預(yù)試驗(yàn)來驗(yàn)證該儀器是否符合檢測(cè)樣品的規(guī)定要求,復(fù)現(xiàn)性怎么樣、準(zhǔn)確度會(huì)不會(huì)有偏移,結(jié)果是否可信等。所以儀器驗(yàn)證就是為了保證所檢測(cè)出的結(jié)果是否可信、準(zhǔn)確,這是很有必要的,只有經(jīng)過驗(yàn)證的儀器,確保該儀器各部分都在良好的情況下才能用于細(xì)胞數(shù)目的檢測(cè)。
4.細(xì)胞計(jì)數(shù)儀驗(yàn)證項(xiàng)目
(1)安裝確認(rèn)
a. 文件確認(rèn)
b. 附件確認(rèn)
c. 安裝環(huán)境確認(rèn)
d. 安裝情況確認(rèn)
(2)運(yùn)行功能確認(rèn)
a. 運(yùn)行功能確認(rèn)
b. 軟件控制功能測(cè)試
(3)性能確認(rèn)
a. 準(zhǔn)確度測(cè)試
b. 線性關(guān)系測(cè)試
c. 重復(fù)性測(cè)試
d. 細(xì)胞活率判定測(cè)試
5.注意事項(xiàng)
(1) 每次使用前檢查檢出室或檢出器細(xì)孔是否被污染,檢出器細(xì)孔是否被損壞,細(xì)胞計(jì)數(shù)定量隔膜泵和檢出器之間的管道是否堵塞等;
(2) 取樣計(jì)數(shù)前,充分混勻細(xì)胞懸液,使分散成單個(gè)細(xì)胞;
(3) 如果感覺細(xì)胞數(shù)量較多時(shí),可以從細(xì)胞懸液中吸取10μL至100μL,用少量PBS稀釋后再作計(jì)數(shù);
(4) 上機(jī)前注意檢查是否有氣泡,也不能讓懸液流入旁邊槽中;
(5) 所用的稀釋器、吸樣管要經(jīng)過校準(zhǔn);
(6) 檢測(cè)前試樣混勻很重要,如果無旋轉(zhuǎn)式混勻器應(yīng)顛倒混勻至少8次;
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華譜&澤恒是專注于為生物制藥行業(yè)提供實(shí)驗(yàn)室儀器計(jì)量校準(zhǔn)、GMP驗(yàn)證服務(wù)/3Q驗(yàn)證/設(shè)備確認(rèn)/廠房驗(yàn)證的專業(yè)服務(wù)商。我們給制藥客戶解決的是一站式QC/QA/工程/驗(yàn)證等事業(yè)部的質(zhì)控外包服務(wù)。
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